पॉलिमोरेज चेन रिएक्शन (पीसीआर) आणविक जीव विज्ञान में एक वैज्ञानिक तकनीक है, जो कई मैजेंटूड ऑर्डर के विपरीत, हजारों की हजारों प्रतियों को हजारों की प्रतियां उत्पन्न करने के लिए निश्चित डीएनए अनुक्रम की लाखों प्रतियों को उत्पन्न करती है।
यह विधि थर्मल साइकिलिंग पर निर्भर करती है। डीएनए में मेलबालन और डीएनए की एंजाइमैटिक प्रतिकृति की प्रतिक्रिया के लिए बार -बार शीतलन चक्र शामिल है। एक निश्चित क्षेत्र में अनुक्रमों को शामिल करके लक्ष्य क्षेत्र की ओर लक्ष्य क्षेत्र के साथ डीएनए पॉलीमज़ (जिसके बाद विधि का नाम दिया गया है)। चयनात्मक और विस्तार की अनुमति देने के लिए प्रवेश (छोटे डीएनए अनुभाग) महत्वपूर्ण घटक हैं। जैसे -जैसे पीसीआर विकसित होता है। उत्पन्न डीएनए का उपयोग सेल्फ-रिप्लेड के लिए एक मॉडल के रूप में किया जाता है।
अधिकांश पीसीआर एप्लिकेशन स्थिर पॉलीमरेस डीएनए का उपयोग करते हैं। जैसे कि वास्तविकता में विभिन्न एंजाइमों में पॉलीमरेस जीवाणु थर्मस एक्वाटिकस का सामना करना पड़ता है। यह पॉलिमरेस डीएनए एक एंजाइमैटिक और डीएनए मॉडल (प्रवेश) भी होगा।
एलिगो अलग -अलग स्ट्रेच का उपयोग करके न्यूक्लियोटाइड डीएनए निर्माण ब्लॉकों से एक नया डीएनए एकत्र करता है, क्योंकि संयोग की शुरुआत के लिए डीएनए आवश्यक है। पीसीआर के तरीके थर्मल साइकिलिंग का उपयोग करते हैं, अर्थात, बारी -बारी से वार्म अप करें और पीसीआर नमूने को एक निश्चित तापमान चरण संख्या में ठंडा करें।
यह थर्मल साइकिलिंग चरण पहले मिगल डीएनए नामक प्रक्रिया में डबल कॉइल डीएनए में उच्च तापमान के लिए शारीरिक रूप से अलग एक्सटेंशन के लिए आवश्यक है। कम तापमान पर लक्ष्य डीएनए के चयनात्मक विस्तार के लिए, डीएनए का उपयोग प्रत्येक मैट्रिक्स के रूप में किया जाता है जो पोलीमरेज़ द्वारा डीएनए के संयोजन में धारीदार होता है। कैद के उपयोग के परिणामों द्वारा उत्पन्न चयन जो एक विशिष्ट थर्मल चक्र के तहत विस्तार के लिए एक निश्चित डीएनए क्षेत्र है, जो कि स्थितियां अतिरिक्त हैं।
पॉलिमरेज चेन श्रृंखला के साइकल का व्यवस्थित चरण :-
यहां चार साइकिल प्रदर्शित की जाती हैं। ब्लू लाइन डीएनए मॉडल को प्रदर्शित करती है, जिसके द्वारा इनपुट लंबा होता है, जो कि एक छोटे डीएनए उत्पाद (ग्रीन लाइन) देने के लिए पोलीमरेज़ डीएनए (सर्कल लाइट ग्रीन) द्वारा विस्तृत होता है, जो एक मॉडल के रूप में उपयोग किया जाता है, जैसे ही पीसीआर विकसित होता है, समाप्त हो जाता है।
इन सबसे ऊपर, पीसीआर को दोहराया तापमान परिवर्तन, चक्र कहा जाता है। प्रत्येक चक्र के साथ, सामान्य रूप से 2-3 विभिन्न तापमान चरणों में अक्सर तीन को शामिल करके 20 से 40 की संख्या शामिल होती है।
उच्च तापमान (> 90 ° C) पर लेने से पहले साइकिल एक प्लग से आती है और एक अंतिम उत्पाद विस्तार या एक संक्षिप्त भंडारण के लिए अंत से आता है। उपयोग किए गए तापमान और अवधि का उपयोग प्रत्येक चक्र में पैरामीटर प्रकारों के अनुसार किया जाता है। उनके डीएनए कटौती के लिए विकसित एंजाइमैटिक प्रतिक्रिया में प्रवेश द्वार के (टीएम) (टीएम) के डिवुलेट्स और (टीएम) का केंद्रीकरण शामिल है।
(i) प्रारंभिक चरण:-
यह चरण 94-96 ° C (या 98 ° C की तापमान प्रतिक्रिया की गर्मी को सम्मिलित करता है यदि मोसीन से अधिक पोलीमरेज़ का उपयोग किया जाता है), जो 1 से 9 मिनट के लिए बनाए रखा जाता है। यह केवल पॉलीमरेस डीएनए के लिए आवश्यक है, जिसे हॉट स्टार्ट पर पीसीआर द्वारा सक्रियण की आवश्यकता होती है।
(ii) अप्राकृतिक चरण:-
यह चरण नियमित रूप से साइकिल चलाने की पहली घटना है और 20-30 सेकंड के लिए 94-98 डिग्री सेल्सियस की प्रतिक्रिया को गर्म करता है। अलग लांस डीएनए आपूर्ति पैटर्न के बीच हाइड्रोजन लिंक को अलग करके डीएनए डीएनए डीएनए के विलय का कारण बनता है।
(iii) ताप चरण:-
एक सही डीएनए मॉडल में प्रवेश के तापमान को आवंटित करने के लिए प्रतिक्रिया तापमान 50-65 डिग्री सेल्सियस पर कम है। उपयोग किए गए इनपुट के तहत मुख्य रूप से गर्म तापमान लगभग 3 से 5 डिग्री सेल्सियस है।
स्थिर डीएनए डीएनए हाइड्रोजन बॉन्ड केवल तभी बनाए जाते हैं जब इनपुट एकल मैट्रिक्स अनुक्रम के लिए अधिक सक्रिय रूप से अनुरूप होते हैं। पॉलिमरगेज इनपुट मॉडल लिंक हाइब्रिड और डीएनए एकत्रीकरण शुरू होता है।
(iv)अंतिम दीर्घीकरण :-
इस चरण में तापमान उपयोग किए गए पोलीमरेज़ डीएनए पर निर्भर करता है। तकनीकी पोलीमरेज़ में 75-80 डिग्री सेल्सियस पर एक उपयुक्त गतिविधि तापमान होता है और इस एंजाइम के साथ, 72 डिग्री सेल्सियस के तापमान का उपयोग आम तौर पर किया जाता है। इस चरण में DNTP पॉलिम्स जोड़कर, मॉडल को डीएनए मैट्रिक्स के किनारे की ओर नए डीएनए स्ट्रैंड के अंत में 3 हाइड्रॉक्सिल समूहों के साथ DNTP फॉस्फेट के 5 समूहों को हल करके 5 से 3 दिशाओं में एकत्र किया जाता है। डीएनए अनुभाग की लंबाई जो दोनों पर निर्भर करेगी। एक नियम के रूप में, उचित तापमान पर पॉलीमरेस डीएनए के प्राधिकरण को एक हजार आधार पर बहुलक किया जाता है। उचित स्थिति में, यह कहना है कि यदि प्रत्येक विस्तार चरण पर एक सीमित आधार पर अभिकर्मक के कारण यहां कोई सीमा नहीं है, तो डीएनए लक्ष्य की मात्रा, जो विशिष्ट डीएनए के ज्यामितीय उपयोग में उपयोगी है।
(V) अंतिम संचालन :-
यह एकल चरण अंतिम पीसीआर बाइक के बाद 5 से 15 मिनट के लिए 70-74 डिग्री सेल्सियस पर काम करता है ताकि यह सुनिश्चित हो सके कि अकेले एक एकल स्ट्रैंड पूरी तरह से चौड़ा है।
(Vi) अंतिम संचालन:-
इस चरण का उपयोग प्रतिक्रिया के अल्पकालिक भंडारण के लिए असीमित समय के लिए 4-15 डिग्री सेल्सियस पर किया जा सकता है।
परीक्षण करने के लिये कि PCR से उत्पन्न अनुमानित DNA खण्ड एगारोज जेल इलेक्ट्राफॉरेसिस PCR प्रोडक्ट के आकर पृथकीकरण के लिये नियोजित किया जाता है । पीसीआर उत्पाद का आकार डीएनए पैमाने (आणविक भार मार्कर) के साथ तुलना द्वारा निर्धारित किया जाता है, जिसमें परिचित अनुभाग के डीएनए अनुभाग और पीसीआर उत्पाद के पास जेल ज्ञान के डीएनए शामिल हैं। संभावित डीएनए शिथिलों में पीसीआर उत्पादों के विश्लेषण या शुद्धि के लिए क्षेत्र क्षेत्र के विश्लेषण या शुद्धि के लिए क्षेत्र के स्थानीय पृथक्करण का उपयोग करके क्षेत्र के उपयोग और प्रतिक्रिया स्थापना के बीच कार्य क्षेत्र को साफ करने के लिए क्षेत्र का उपयोग शामिल है। एंट्री डिज़ाइन तकनीक पीसीआर उत्पादों को विकसित करने और कोटलैन में अतिरिक्त उत्पादों का निर्माण करने के लिए महत्वपूर्ण है और वैकल्पिक बफर घटक पोलीमरेज़ का उपयोग लंबी या अन्य समस्याओं का विस्तार करने में मदद कर सकता है। बफर सिस्टम में फार्मामिड जैसे अभिकर्मकों के परिवर्धन पीसीआर की विशिष्टता और मूल को बढ़ा सकते हैं।
पॉलिमरेज चेन श्रृंखला की कार्य-प्रणाली :-
(A) रोबकल्चर (लक्ष्य डीएनए का विलय) :
लक्ष्य डीएनए (100 और 5,000 विकल्पों के बीच) की तुलना में डीएनए (15 सेकंड से 95 डिग्री सेल्सियस के लिए) करने के लिए अनुक्रम (100 और 5,000 विकल्पों के बीच) के साथ लक्ष्य। ताकि इसके सही किस्में अलग हो जाएं (चरण 1)। इस प्रक्रिया को लक्ष्य डीएनए का संलयन कहा जाता है। अलग होने के बाद, प्रत्येक स्ट्रैंड संश्लेषण के लिए कार्य करना शुरू कर देता है।
(B) प्राइमरों का पुनरावृत्ति :-
दूसरे चरण में, एलोनुग्लियोटाइड्स के प्राइमरों में Dnichard DNA स्ट्रैंड्स का एक एनीज़िज़्म होता है। चूंकि प्रत्येक lygonucleotide प्राइमर का न्यूक्लियोटाइड अनुक्रम सरल स्ट्रैंड मोल्ड के 3 ‘छोर के लिए एकदम सही है, प्राइमर्स प्रत्येक मोल्ड के एनेल (हाइब्रिज) को धक्का देते हैं। प्राइमरों को अत्यधिक मात्रा में जोड़ा जाता है और तापमान 60 सेकंड के लिए 68 ° C तक कम हो जाता है। नतीजतन, हाइड्रोजन कनेक्शन प्राइमरों द्वारा किए जाते हैं। दूसरे शब्दों में, डीएनए अनुक्रमों (चरण 2) के दो ईएस पर एक सीआईडीएन बन जाता है। तापमान अलग है। लेकिन बहुत अधिक तापमान की मरम्मत की जाती है।
(c) भवन विस्तार (गुणन):-
प्रतिक्रिया मिश्रण परमाणु ट्राइफॉस्फेट (डीएटीपी, डीजीटीपी, डीसीटीपी) और डीएनए पॉलीमरेस थर्मोस्टेल का मिश्रण करता है। डीएनए प्राइमरों के पोलीमरेज़ को गुणा करने की प्रक्रिया को तेज (सुधार) करता है। और यही कारण है कि प्राइमरों का विस्तार (6 डिग्री सेल्सियस) है। नतीजतन, लक्ष्य डीएनए अनुक्रमों (चरण 3) की प्रतियों का संश्लेषण।
पीसीआर डिवाइस में, एक ही पॉलिमरेस डीएनए का उपयोग किया जाता है, जो थर्मोस्टेबल IE है जो उच्च तापमान पर काम कर सकता है। यह अंत करने के लिए, पीसीआर तकनीक में दो व्यापक एंजाइम (एंजाइम) TAQ पोलीमरेज़ (लिटोलरिस के थर्मस एक्वाटिकस) का उपयोग किया जाता है।
प्रत्येक सिंथेटिक चक्र के बाद, ये एंजाइम डीएनए के गलत समापन पर सापेक्ष स्थिरता दिखाते हैं। यह पीसीआर की लागत को भी कम करता है और स्वचालित गर्मी का कारण बनता है। प्रत्येक चक्र के बाद लक्ष्य अणुओं की संख्या दोगुनी हो जाएगी और इसलिए प्रगतिशील प्रगतिशील डीएनए गतिविधि प्रत्येक चक्र के बाद और परिणामस्वरूप दोगुनी हो जाएगी। अपूर्ण व्याकुलता के कारण, यह 100%से कम है।
